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重組蛋白A預裝柱填料

蛋白A可與多數哺乳動物IgG的Fc端特異性結合。使用的rec-Protein A是通過基因工程-重組蛋白的方法表達獲得。由于重組表達的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特異性結合位點，特異性更好。

本產品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術，將填料中有限的羥基(-OH)結合位點充分活化，使得單位體積中結合更多蛋白A，最終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

蛋白A可與多數哺乳動物IgG的Fc端特異性結合。使用的rec-Protein A是通過基因工程-重組蛋白的方法表達獲得。由于重組表達的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特異性結合位點，特異性更好。

本產品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術，將填料中有限的羥基(-OH)結合位點充分活化，使得單位體積中結合更多蛋白A，最終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

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產品描述資料下載

l 產品技術指標

rec-Protein A/Sepharose 比值：2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose

rec-Protein A分子量：34.85 KDa

每分子rec-Protein A可結合IgG位點數：4個

rec-Protein A可結合白蛋白位點數：無

線性流速：300-500 cm/h

耐壓指數：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事項

請在實驗前仔細閱讀本rProtein A預裝柱使用說明。同時，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復至室溫使用。

l 產品保存

產品儲存于2-8℃，保質期兩年。

l rec-Protein A預裝柱純化IgG抗體步驟

以下實驗方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rec-Protein A的結合能力不同，具體情況請參考表1。

1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對1× PBS（pH 7.4）透析過夜；

2. 將rec-Protein A-Sepharose裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結合效果可將流穿液再上樣，重復2遍（或將樣品1次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動，結合30 min）；

4. 樣品結合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；

5. 洗脫IgG，向層析柱上端加入洗脫液（100 mM甘氨酸，pH 2.7），用預先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。

6. 用5倍柱體積再生緩沖液（100 mM甘氨酸，pH 2.0）進行再生處理，再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。最后于層析柱中加入10倍柱體積, 20% Ethanol，4~8 ℃冰箱保存處理。

l 同類產品純化效果比較

美國某知名品牌的rProtein A Sepharose 4FF 親和層析柱對人血清進行純化，其對人IgG的最大結合量約為34 mg/mL Medium。

表1 rProtein A與不同來源Ig的反應活性情況

IgG類型	Protein A	IgG類型	Protein A	IgG類型	Protein A
人 IgG1	++++	小鼠 IgG2b	+++	倉鼠 Ig	+
人 IgG2	++++	小鼠 IgG3	++	豚鼠 Ig	++++
人IgG3	-	小鼠 IgM	+/-	牛 Ig	++
人IgG4	++++	大鼠 IgG1	-	馬	++
人IgA	++	大鼠 IgG2a	-	奶牛	++
人n IgD	++	大鼠 IgG2b	-	豬	+++
人IgE	++	大鼠 IgG2c	+	綿羊	+/-
人 IgM	++	大鼠 IgM	+/-	山羊	-
小鼠 IgG1	+	兔 Ig	++++
小鼠 IgG2a	++++	雞 Ig	-

表2 rProtein A預裝柱系列產品參數

特性	rProtein A	特性	rProtein A
柱體積規(guī)格	1mL，5mL	填料穩(wěn)定性	＞20純化周期
基質組成	4%高交聯(lián)度瓊脂糖	pH穩(wěn)定性	pH 2~11
基質平均粒徑	90μm	推薦工作pH范圍	pH 3~10
功能基團	rProtein A：34.85kDa； IgG結合位點：4	推薦在位清洗pH范圍	pH 2~11
配基密度	≈3mg rProtein A/mL 基質	工作溫度	4~40℃
結合能力	30-55mg人IgG/mL填料	運輸條件	20%乙醇浸泡，室溫運輸
推薦流速	30~150cm/mL	貯藏條件	20%乙醇條件下， 4~8℃保存